Desenvolvimento in silico de uma vacina multi-epítopo contra Campylobacter fetus subsp. venerealis através de vacinologia reversa

Resumo

Objectivos: Este estudo in silico teve como objetivo construir uma vacina multi-epítopo contra Campylobacter fetus subsp. venerealis (Cfv), o agente etiológico da Campilobacteriose Genital Bovina (CGB), utilizando uma abordagem de vacinologia reversa.

Material e métodos: O proteoma da estirpe de referência Cfv NCTC 10354 foi analisado com o objetivo de identificar proteínas extracelulares e da membrana externa, potencialmente envolvidas na virulência. Estas proteínas foram avaliadas quanto à sua antigenicidade, alergenicidade, propriedades físico-químicas e homologia com proteínas de origem bovina. As proteínas mais promissoras foram selecionadas para predição de epítopos de linfócitos B e T. A conservação dos epítopos selecionados foi verificada com base no genoma de 31 estirpes de Cfv. Os epítopos conservados e com melhor classificação foram usados para desenhar uma vacina multi-epítopo, cuja resposta imunitária foi simulada in silico. Após a otimização de codões para expressão em Escherichia coli, a sequência da vacina foi clonada in silico num vetor plasmídico pET-30a(+).

Resultados: Foram identificadas nove proteínas adequadas para o desenvolvimento de uma vacina contra Cfv. Entre elas, a proteína da membrana externa OmpA e a proteína flagelar FliK foram selecionadas para a predição de epítopos. Para contruir a vacina candidata, foram selecionados 2 epítopos de OmpA e 13 epítopos de FliK, unidos por sequências espaçadoras GPGPG para formar um fragmento multi-epítopo de 241 aminoácidos, conectado à subunidade B da toxina colérica através de uma sequência espaçadora EAAAK. A vacina candidata foi prevista como antigénica, não tóxica e não alergénica e a sua sequência nucleotídica foi otimizada e clonada in silico com sucesso no vetor pET-30a(+). As simulações imunológicas demonstraram a capacidade da vacina candidata para estimular uma resposta imunitária.

Conclusão: Através da aplicação da metodologia de vacinologia reversa foi construída uma vacina contra Cfv, adequada para subsequente validação experimental in vitro e in vivo, com potencial de ser utilizada no controlo da CGB.

Palavras-chave: Campilobacteriose genital bovina, Campylobacter fetus subsp. Venerealis, Vacinologia reversa, Vacina.

Financiamento: Este estudo foi financiado pela Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) e pelo Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional (FEDER), no âmbito dos projetos PTDC/CVT-CVT/30145/2017 e VITINDEME (PDR2020-101-031789). Este estudo também foi financiado pelo Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal – CIISA (Project UIDB/00276/2020, financiado pela FCT) e pelo Laboratório Associado para a Ciência Animal e Veterinária (LA/P/0059/2020 – AL4AnimalS).