Avaliação de ensaios de diagnóstico molecular para a deteção de Campylobacter fetus subsp. venerealis em amostras prepuciais bovinas

Resumo

Objectivos: Este estudo teve como objetivo comparar ensaios de PCR em tempo real para deteção de C. fetus subsp. venerealis, o agente patogénico responsável pela campilobacteriose genital bovina, em 308 amostras prepuciais.

Materiais e métodos: A deteção ao nível da subespécie (C. fetus subsp. venerealis) foi avaliada em quatro ensaios de PCR em tempo real, dois direcionados para a sequência de inserção ISCfe1 e dois para o gene parA. A deteção ao nível da espécie (C. fetus) envolveu um ensaio direcionado para o gene nahE e um kit comercial de PCR em tempo real (LSI VetMAX^TM C. fetus kit, Life Technologies).

Resultados: Na deteção ao nível da subespécie, os ensaios direcionados quer para diferentes alvos (parA e ISCfe1), quer para o mesmo alvo molecular mostraram uma elevada percentagem de resultados discordantes nas amostras analisadas. Por outro lado, todas as amostras positivas nestes ensaios (n=169) revelaram-se negativas nos ensaios de deteção de C. fetus, o que sugere a transferência horizontal destes alvos de subespécie para outras espécies bacterianas. A análise da discrepância entre os resultados obtidos na deteção dos alvos de espécie e subespécie levou à descoberta de uma nova espécie do género Campylobacter no prepúcio de touros, denominada de Campylobacter portucalensis. Foram isoladas três estirpes de C. portucalensis com sequências com elevada identidade com a sequência ISCfe1 e parA, as quais foram identificadas como responsáveis pelos resultados falso-positivos nos ensaios de deteção de C. fetus subsp. venerealis.

Conclusões: Este estudo demonstrou que os métodos moleculares direcionados para os alvos mais comumente usados na identificação de C. fetus subsp. venerealis, incluindo o gene parA e a sequência de inserção ISCfe1, podem originar uma elevada taxa de resultados falso-positivos. Esta falha de especificidade poderá dever-se à presença de sequências homólogas no genoma de outras espécies bacterianas, tal como foi evidenciado em C. portucalensis.

Palavras-chave: Campylobacter fetus subsp. venerealis; Campilobacteriose Genital Bovina; Campylobater portucalensis; Diagnóstico molecular.

Financiamento: Este estudo foi financiado pela Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT) através do projeto PTDC/CVT-CVT/30145/2017, co-financiado pelo Fundo Europeu de Desenvolvimento Regional (FEDER). Este trabalho também foi financiado pelo Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal (Projeto UIDB/00276/2020).